Plásmido Doble Nickase (m) TRAF2: sc-423493-NIC

El gen Traf2 de ratón codifica TRAF2, un adaptador y ligasa E3 de ubiquitina que acopla la señalización de la superfamilia de receptores de TNF a la activación posterior de las vías NF-κB y MAPK, configurando programas transcripcionales que gobiernan la inflamación, la supervivencia celular y las respuestas al estrés. Mediante interacciones con cIAPs, RIPK1 y receptores aguas arriba como TNFR y CD40, TRAF2 modula la ubiquitinación ligada a K63 y el ensamblaje de complejos de señalización que determinan la producción de citocinas y la decisión entre apoptosis y supervivencia. La actividad de Traf2 también se vincula a la regulación de NF-κB no canónica a través del control de la estabilidad de NIK, influyendo en la biología de las células B y la homeostasis inmunitaria. La señalización desregulada de TRAF2 se ha implicado en patología mediada por el sistema inmune y en contextos de señalización oncogénica, lo que convierte a Traf2 en un nodo común para estudios mecanísticos de la inflamación inducida por receptores y la señalización de supervivencia.

TRAF2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Traf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Traf2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Traf2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Traf2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.