TP53INP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-405261-LAC-2

Il gene umano TP53INP2 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2; noto anche come DOR) codifica un regolatore dell’autofagia responsivo allo stress che funge da impalcatura per il reclutamento delle proteine ATG e supporta la formazione e la maturazione degli autofagosomi. TP53INP2 partecipa a programmi di sensing dei nutrienti e trascrizionali collegati alla segnalazione di p53 e all’autofagia controllata da mTOR, influenzando la proteostasi, il controllo di qualità mitocondriale e le decisioni di sopravvivenza cellulare in condizioni di stress metabolico. Un’espressione o localizzazione deregolata di TP53INP2 è stata associata a un flusso autofagico alterato in contesti rilevanti per la biologia dei tumori, la neurodegenerazione e i disturbi metabolici, nei quali vie di smaltimento compromesse possono incidere sulla stabilità genomica e sull’infiammazione. L’editing genetico di TP53INP2 consente studi meccanicistici sull’architettura della via dell’autofagia, sull’epistasi con i fattori ATG core e su screening di genomica funzionale che collegano la segnalazione da stress a fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale TP53INP2 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TP53INP2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TP53INP2 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TP53INP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TP53INP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TP53INP2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.