Tom22 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402198-ACT

Il gene umano **TOMM22** codifica **Tom22**, una subunità recettoriale centrale del complesso **TOM** (translocasi della membrana mitocondriale esterna), che riconosce le proteine precursori mitocondriali codificate dal nucleo e ne coordina l’importazione nei mitocondri. Organizzando le interazioni con altri recettori del TOM e con il canale **Tom40**, Tom22 sostiene la proteostasi mitocondriale, il mantenimento della catena respiratoria e la biogenesi mitocondriale, influenzando così il metabolismo energetico e la segnalazione legata all’apoptosi. Alterazioni dell’importazione proteica mitocondriale e della funzione del complesso TOM sono associate a risposte cellulari allo stress, riprogrammazione metabolica e disfunzione mitocondriale osservate in diversi contesti patologici, inclusi la neurodegenerazione e la biologia dei tumori. **TOMM22** rappresenta quindi un nodo utile per analizzare come la capacità di importazione mitocondriale moduli l’integrità dell’organello e le reti di segnalazione a valle.

Tom22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TOMM22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tom22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TOMM22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TOMM22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tom22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TOMM22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tom22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tom22 nelle cellule tumorali con espressione di TOMM22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.