TMIE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423149

Panoramica

Il gene Tmie del topo codifica TMIE, una piccola proteina transmembrana che funge da componente essenziale del macchinario di meccanotrasduzione nelle cellule ciliate dell’orecchio interno. TMIE partecipa all’assemblaggio e alla stabilizzazione del complesso del canale MET nelle stereociglia, supportando la conversione degli stimoli meccanici in potenziali recettoriali che guidano la segnalazione uditiva. L’alterazione di TMIE compromette la funzione del fascio ciliare, modifica i flussi ionici e l’eccitabilità di membrana e danneggia le vie di trasduzione sensoriale necessarie per udito ed equilibrio. Difetti genetici in TMIE/Tmie sono associati a fenotipi di sordità ereditaria, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dello sviluppo cocleare, della fisiologia delle cellule ciliate e della funzione dei circuiti dei neuroni sensoriali in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TMIE (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tmie in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tmie insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tmie a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TMIE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tmie per lo studio della segnalazione di TMIE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tmie critici per la funzione di TMIE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tmie per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TMIE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TMIE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tmie. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TMIE Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TMIE (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tmie per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tmie definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.