Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM106C: sc-413113-ACT

TMEM106C codifica una proteína transmembrana multipaso predicha, que se cree que contribuye a la organización de membranas y al tráfico de proteínas dentro del sistema secretor y endolisosomal. Como miembro de la familia TMEM106, TMEM106C se estudia en el contexto de la homeostasis de los orgánulos, el transporte vesicular y la regulación del recambio proteico, procesos que se entrecruzan con las respuestas al estrés celular y las redes de señalización. La expresión alterada de reguladores del tráfico transmembrana puede remodelar la función lisosomal, el flujo de autofagia y la señalización inflamatoria o metabólica aguas abajo. Estos mecanismos hacen de TMEM106C una diana útil para investigar cómo la dinámica de los compartimentos de membrana influye en las transiciones del estado celular y en fenotipos asociados a enfermedad en sistemas modelo humanos.

TMEM106C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM106C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM106C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM106C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM106C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM106C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM106C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM106C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM106C en células tumorales con expresión de TMEM106C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.