TM9SF4 Plasmide Double Nickase (h): sc-406168-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TM9SF4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TM9SF4 Double Nickase Plasmid (h) e il TM9SF4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TM9SF4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TM9SF4 Antibody (A-3): sc-374473
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TM9SF4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TM9SF4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TM9SF4 (membro 4 della superfamiglia transmembrana 9) codifica una proteina di membrana multipasso arricchita nei compartimenti dell’endomembrana, dove è stata collegata alla regolazione del traffico vescicolare e dell’omeostasi degli organelli. TM9SF4 è stata implicata nel controllo della maturazione endosoma–lisosoma e di processi associati al Golgi che influenzano lo smistamento delle proteine e la composizione delle membrane. Attraverso questi ruoli, TM9SF4 può influire sul turnover dei recettori, sulla proteostasi della superficie cellulare e su programmi di traffico adattativi allo stress. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di TM9SF4 sono state associate, in alcuni contesti, a fenotipi oncogenici, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla fitness delle cellule tumorali, l’invasione e l’adattamento al microambiente.
TM9SF4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TM9SF4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TM9SF4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TM9SF4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TM9SF4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.