TLR4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400068-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TLR4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TLR4 Double Nickase Plasmid (h) e il TLR4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TLR4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TLR4 Antibody (25): sc-293072
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TLR4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400068-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TLR4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400068-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il recettore Toll-like 4 (TLR4) è un recettore di riconoscimento di pattern (pattern-recognition receptor) che rileva il lipopolisaccaride batterico e alcuni ligandi endogeni associati al pericolo, avviando la segnalazione dell’immunità innata nelle cellule mieloidi e nei tessuti di barriera. Il legame del ligando promuove la formazione del complesso recettoriale con MD-2 e CD14 e attiva cascate dipendenti da MyD88 e TRIF, guidando i programmi trascrizionali di NF-κB, AP-1 e IRF3/7 e le conseguenti risposte a valle con produzione di citochine e interferoni di tipo I. La segnalazione di TLR4 modella la polarizzazione dei macrofagi, il priming dell’inflammasoma e il crosstalk con le vie MAPK e JAK/STAT che coordinano l’omeostasi infiammatoria. Un’attività di TLR4 deregolata è stata implicata nell’infiammazione associata alla sepsi, nelle patologie autoimmuni e nei disturbi infiammatori cronici, nei processi neuroinfiammatori e nel rimodellamento del microambiente tumorale.
TLR4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TLR4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TLR4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TLR4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TLR4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.