TLR3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400512-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TLR3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TLR3 Double Nickase Plasmid (h) e il TLR3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TLR3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TLR3 Antibody (TLR3.7): sc-32232
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TLR3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400512-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TLR3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400512-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il recettore Toll-like 3 (TLR3) è un recettore endosomiale di riconoscimento dei pattern che rileva l’RNA a doppio filamento derivato da virus o da cellule danneggiate e avvia la segnalazione dell’immunità innata. In seguito al legame con il ligando, TLR3 segnala principalmente attraverso l’adattatore TRIF per attivare risposte di interferone di tipo I guidate da IRF3/IRF7 e programmi trascrizionali infiammatori dipendenti da NF-κB. Questa via regola la produzione di citochine e chemochine, la presentazione dell’antigene e il dialogo con l’immunità adattativa, influenzando la difesa antivirale e l’omeostasi immunitaria. Un’attività alterata di TLR3 è stata associata a una maggiore suscettibilità alle infezioni virali e a fenotipi infiammatori e autoimmuni, ed è frequentemente oggetto di studio nelle ricerche sulla neuroinfiammazione e sul microambiente tumorale-immunitario.
TLR3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TLR3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TLR3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TLR3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TLR3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.