Tiam2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404326-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Tiam2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Tiam2 Double Nickase Plasmid (h) e il Tiam2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TIAM2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Tiam2 Antibody (C-5): sc-514090
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Tiam2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404326-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tiam2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404326-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TIAM2 codifica Tiam2, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) specifico per Rac che promuove la conversione di Rac1/2 nello stato attivo legato al GTP, collegando segnali a monte provenienti da recettori e adesioni al rimodellamento del citoscheletro di actina. Attraverso la regolazione della formazione dei lamellipodi, della polarità cellulare e del turnover delle adesioni focali, Tiam2 contribuisce a vie che controllano migrazione, invasione e crescita dei neuriti, includendo nodi di segnalazione a valle di integrine, recettori per fattori di crescita e PI3K. L’attività di TIAM2 si intreccia con i circuiti delle GTPasi della famiglia Rho e con programmi associati a MAPK che coordinano la dinamica del citoscheletro con risposte trascrizionali. Una segnalazione Rac deregolata e un’espressione alterata di TIAM2 sono state associate alla motilità delle cellule tumorali e a caratteristiche metastatiche in diversi contesti oncologici, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico negli studi sul movimento cellulare e sulla morfogenesi.
Tiam2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TIAM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TIAM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TIAM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TIAM2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.