THAP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405020-ACT

THAP1 codifica un fattore di trascrizione legante il DNA contenente un dominio THAP, che regola programmi di espressione genica collegati al controllo del ciclo cellulare, alla repressione trascrizionale associata alla cromatina e alla funzione neuronale. È stato riportato che THAP1 interagisce con cofattori nucleari e influenza vie che governano proliferazione, differenziamento e apoptosi attraverso la regolazione, specifica per promotore, di geni bersaglio. Nel sistema nervoso, l’attività di THAP1 è implicata nel mantenimento dell’omeostasi trascrizionale e dell’organizzazione nucleare; una sua deregolazione è associata a fenotipi di distonia ereditaria. In quanto regolatore trascrizionale, THAP1 rappresenta un nodo utile per studiare come il legame al DNA specifico per sequenza e il reclutamento di cofattori plasmino le reti geniche a valle.

THAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di THAP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

THAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus THAP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione THAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di THAP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus THAP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da THAP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via THAP1 nelle cellule tumorali con espressione di THAP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.