TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400144-NIC

TGFBR2 codifica il recettore 2 del fattore di crescita trasformante beta (TGF-βR2), una chinasi transmembrana serina/treonina che lega i ligandi TGF-β e avvia la segnalazione canonica mediata da SMAD2/3 tramite la fosforilazione di TGFBR1, oltre a interagire con le vie MAPK, PI3K/AKT e della famiglia Rho. Attraverso queste reti, TGF-βR2 regola la transizione epitelio-mesenchimale, il controllo del ciclo cellulare, la modulazione immunitaria e l’omeostasi della matrice extracellulare, influenzando lo sviluppo tissutale e la riparazione delle ferite. Alterazioni della funzione o dell’espressione di TGFBR2 compromettono la fedeltà della via di segnalazione e sono associate a programmi fibrotici deregolati e a processi oncogenici, inclusi cambiamenti nell’inibizione della crescita, nell’invasione e nella segnalazione del microambiente tumorale. Poiché la segnalazione TGF-β è fortemente dipendente dal contesto, TGFBR2 è spesso studiato per analizzare risposte trascrizionali specifiche per tipo cellulare e il controllo a feedback all’interno dei circuiti di citochine e di risposta allo stress.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TGFBR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TGFBR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TGFBR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TGFBR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.