TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400144-ACT

TGFBR2 codifica il recettore di tipo II del transforming growth factor beta (TGF-β), una chinasi transmembrana serina/treonina che, dopo il legame del ligando e la formazione del complesso recettoriale con i recettori di tipo I, avvia la segnalazione canonica mediata da SMAD2/3. Attraverso queste vie, TGFBR2 regola il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione, l’apoptosi, la modulazione immunitaria e il rimodellamento della matrice extracellulare, e interagisce anche con vie di segnalazione non canoniche quali MAPK, PI3K/AKT e le GTPasi della famiglia Rho. Una segnalazione TGF-β/TGFBR2 deregolata è implicata nella fibrosi, nell’alterata sorveglianza immunitaria, nella transizione epitelio-mesenchimale e nella biologia del microambiente tumorale, mentre varianti con perdita di funzione sono associate a un’omeostasi tissutale aberrante e a una riprogrammazione della segnalazione legata al cancro. Di conseguenza, TGFBR2 rappresenta un nodo chiave per studiare programmi trascrizionali dipendenti dal contesto, che possono favorire l’inibizione della crescita oppure promuovere migrazione e fibrosi.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TGFBR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TGF beta Receptor 2/TGFBR2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TGFBR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TGFBR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TGF beta Receptor 2/TGFBR2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TGFBR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TGF beta Receptor 2/TGFBR2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TGF beta Receptor 2/TGFBR2 nelle cellule tumorali con espressione di TGFBR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.