TFIIB Plasmide Double Nickase (h): sc-401174-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFIIB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFIIB Double Nickase Plasmid (h) e il TFIIB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GTF2B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TFIIB Antibody (D-3): sc-271736
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFIIB Plasmide Double Nickase (h) | sc-401174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIB Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano GTF2B codifica il fattore di trascrizione IIB (TFIIB), una componente fondamentale del complesso di preinizio della RNA polimerasi II che collega TBP/TFIID alla TATA box con la Pol II e contribuisce a posizionare il sito di inizio della trascrizione. TFIIB supporta il riconoscimento del promotore, l’avvio della trascrizione e le prime fasi della fuga dal promotore, influenzando la produzione globale di mRNA e le transizioni dello stato cellulare. Grazie al suo ruolo centrale nella trascrizione dipendente da Pol II, l’alterazione della funzione di TFIIB può influire su vie che controllano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. La disregolazione del macchinario generale di trascrizione, inclusi i fattori che modulano le dinamiche di inizio dipendenti da TFIIB, è stata implicata in programmi trascrizionali oncogeni e in altre malattie guidate da un’espressione genica alterata.
TFIIB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GTF2B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GTF2B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GTF2B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GTF2B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.