Plásmido Doble Nickase (h) TFIIB: sc-401174-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)TFIIB consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFIIB (h) y el plásmido de doble nickasa TFIIB (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GTF2B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TFIIB Anticuerpo (D-3): sc-271736
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) TFIIB | sc-401174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) TFIIB | sc-401174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano GTF2B codifica el factor de transcripción IIB (TFIIB), un componente central del complejo de preiniciación de la ARN polimerasa II que conecta TBP/TFIID en la caja TATA con la Pol II y ayuda a posicionar el sitio de inicio de la transcripción. TFIIB favorece el reconocimiento del promotor, el inicio de la transcripción y la fase temprana de escape del promotor, influyendo en la producción global de ARNm y en las transiciones del estado celular. Debido a su papel central en la transcripción dependiente de Pol II, la alteración de la función de TFIIB puede afectar vías que controlan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación de la maquinaria general de transcripción, incluidos los factores que modulan la dinámica de iniciación dependiente de TFIIB, se ha implicado en programas de transcripción oncogénicos y en otras enfermedades impulsadas por cambios en la expresión génica.
TFIIB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GTF2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GTF2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GTF2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GTF2B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.