TFEB Plasmide Double Nickase (m): sc-437332-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TFEB Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TFEB Double Nickase Plasmid (m) e il TFEB Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tfeb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TFEB Plasmide Double Nickase (m) | sc-437332-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Tfeb** codifica **TFEB**, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix con motivo leucine zipper che agisce da regolatore principale della biogenesi lisosomiale e dell’autofagia coordinando la rete genica **CLEAR**. L’attività di TFEB è controllata in modo stringente da vie di sensing di nutrienti e stress, inclusa la fosforilazione dipendente da **mTORC1**, che influenza la sua ritenzione nel citoplasma rispetto alla traslocazione nel nucleo, modulando così la funzione dei lisosomi, il flusso autofagico e la clearance cellulare. Attraverso questi programmi, TFEB regola la proteostasi, il controllo di qualità mitocondriale e la segnalazione dell’immunità innata, collegando i segnali ambientali al rimodellamento catabolico. Una segnalazione di TFEB deregolata è stata associata a fenotipi da accumulo lisosomiale, stress proteotossico legato alla neurodegenerazione, squilibri metabolici e adattamento delle cellule tumorali allo stress, rendendo **Tfeb** un bersaglio chiave per studi meccanicistici dell’omeostasi cellulare.
TFEB Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tfeb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tfeb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tfeb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tfeb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.