TET2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431916-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TET2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TET2 Double Nickase Plasmid (m) e il TET2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Tet2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TET2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TET2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene Tet2 nel topo codifica la diossigenasi TET2, un regolatore chiave della riprogrammazione epigenetica che catalizza l’ossidazione della 5-metilcitosina a 5-idrossimetilcitosina e ai suoi derivati a valle, modellando così la dinamica della demetilazione del DNA. L’attività di TET2 influenza l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali che governano l’autorinnovamento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, l’impegno di linea e la differenziazione delle cellule immunitarie. Attraverso l’integrazione con i meccanismi di mantenimento della metilazione del DNA e con le vie di modifica della cromatina, TET2 contribuisce a coordinare la funzione degli enhancer e l’espressione genica responsiva alle citochine. L’alterazione della funzione di Tet2 è ampiamente utilizzata per modellare un controllo epigenetico deregolato, rilevante per i meccanismi di malattie ematologiche e infiammatorie, in vivo e in sistemi cellulari.
TET2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tet2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tet2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tet2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tet2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.