TBX18 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401564-ACT

TBX18 codifica un fattore di trascrizione della famiglia T-box che dirige il patterning embrionale e l’organogenesi regolando la specificazione delle linee cellulari e i programmi di differenziamento mesenchimale. Nello sviluppo umano, TBX18 è fortemente associato alla morfogenesi urogenitale e muscoloscheletrica e contribuisce alla formazione del sistema di conduzione cardiaco attraverso il controllo trascrizionale di reti geniche dello sviluppo. La sua attività si intreccia con processi di segnalazione che modellano i confini tissutali e le decisioni sul destino cellulare, incluse vie influenzate da segnali WNT, BMP e FGF. Un’espressione o una funzione di TBX18 deregolata è stata collegata ad anomalie congenite dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali alla base dello sviluppo degli organi e di fenotipi rilevanti per la malattia.

TBX18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TBX18 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TBX18 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TBX18 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TBX18, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TBX18. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TBX18 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TBX18 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TBX18 nelle cellule tumorali con espressione di TBX18 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.