TAZ Plasmide Double Nickase (h): sc-400320-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TAZ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TAZ Double Nickase Plasmid (h) e il TAZ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WWTR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TAZ Antibody (1F1): sc-293183
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TAZ Plasmide Double Nickase (h) | sc-400320-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TAZ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400320-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWTR1 codifica per il co-attivatore trascrizionale TAZ (TAZ/WWTR1), un importante effettore a valle della via di segnalazione Hippo che integra segnali meccanici, polarità cellulare e input dei GPCR per regolare programmi di espressione genica che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e plasticità epitelio-mesenchimale. TAZ trasloca tra citoplasma e nucleo in risposta alla fosforilazione mediata da LATS1/2, associandosi ai fattori di trascrizione della famiglia TEAD per modulare bersagli coinvolti nella crescita tissutale e nel rimodellamento della matrice extracellulare. Un’attività di TAZ deregolata è stata collegata a un’alterata inibizione da contatto e a stati trascrizionali aberranti di tipo staminale, rendendo WWTR1 un nodo frequentemente indagato negli studi di biologia del cancro, segnalazione associata alla fibrosi e sviluppo degli organi. Il suo crosstalk con le vie Wnt/β-catenina, TGF-β/SMAD e di meccano-trasduzione ne rafforza ulteriormente la rilevanza per analizzare il controllo trascrizionale dipendente dal contesto.
TAZ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WWTR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WWTR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WWTR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WWTR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.