TARDBP Plasmide Double Nickase (h): sc-401890-NIC

TARDBP (TDP-43) è una proteina legante RNA/DNA espressa in modo ubiquitario che regola molteplici livelli del metabolismo dell’RNA, inclusi lo splicing del pre-mRNA, la stabilità dei trascritti e il loro trasporto; partecipa inoltre alla regolazione trascrizionale. È localizzata prevalentemente nel nucleo, ma può traslocare nel citoplasma ed essere reclutata nei granuli di stress durante lo stress cellulare, collegandola ai processi di proteostasi e di controllo qualità dell’RNA. L’elaborazione dell’RNA dipendente da TARDBP contribuisce a mantenere l’omeostasi neuronale modulando i programmi di splicing e prevenendo l’inclusione anomala di esoni criptici in lunghi trascritti neuronali. La disregolazione, la mislocalizzazione e l’aggregazione di TDP-43 sono fortemente associate ai meccanismi delle malattie neurodegenerative, tra cui la SLA e la degenerazione lobare frontotemporale, e vengono studiate anche in contesti più ampi di disfunzione delle proteine leganti l’RNA.

TARDBP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TARDBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TARDBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TARDBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TARDBP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.