TAF II p250 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435426

Panoramica

Taf1 codifica TAF II p250 (TAF1), una subunità centrale del complesso TFIID che avvia l’assemblaggio del complesso di pre-inizio della RNA polimerasi II e integra il riconoscimento del promotore con l’output trascrizionale. In quanto regolatore multifunzionale dotato di attività chinasi e acetiltransferasica, TAF1 influenza l’organizzazione della cromatina, l’inizio della trascrizione e programmi di espressione genica legati al ciclo cellulare. Nei sistemi murini, il controllo trascrizionale dipendente da Taf1 è fondamentale per lo sviluppo embrionale, la regolazione dei geni neuronali e le vie della proteostasi che modellano le risposte cellulari allo stress. La deregolazione di TAF1 e della trascrizione mediata da TFIID è stata associata a fenotipi del neurosviluppo e a più ampie alterazioni dell’omeostasi dell’espressione genica rilevanti per la modellizzazione delle malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TAF II p250 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Taf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Taf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Taf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TAF II p250.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Taf1 per lo studio della segnalazione di TAF II p250, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Taf1 critici per la funzione di TAF II p250
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Taf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TAF II p250 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TAF II p250 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Taf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TAF II p250 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TAF II p250 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Taf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Taf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.