Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TAF II p135 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404230-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TAF II p135 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- TAF II p135 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal TAF II p135 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal TAF II p135 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di TAF4. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TAF II p135 Antibody (22): sc-136093
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TAF II p135 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404230-ACT | 20 µg | $397.00 |
TAF4 codifica TAF II p135, una subunità centrale del complesso TFIID che coordina l’inizio della trascrizione da parte della RNA polimerasi II collegando il riconoscimento del promotore all’assemblaggio del complesso di pre-inizio. Attraverso interazioni con TBP e altri TAF, TAF II p135 integra segnali guidati dagli attivatori con il macchinario trascrizionale basale per regolare geni che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e programmi di risposta allo stress. Nell’ambito del controllo trascrizionale generale, un’alterata attività di TAF4 può rimodellare l’output trascrizionale globale e influenzare la proteostasi e le reti regolatorie associate alla cromatina. La disregolazione dei componenti di TFIID, incluso TAF4, è stata collegata alla riprogrammazione trascrizionale osservata in disturbi proliferativi e dello sviluppo, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico negli studi di regolazione genica.
TAF II p135 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TAF4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
TAF II p135 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TAF4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TAF4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TAF II p135. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TAF4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TAF II p135 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TAF II p135 nelle cellule tumorali con espressione di TAF4 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.