Plasmide CRISPR d'Activation (h2) T-cadherin: sc-416752-ACT-2

Le gène humain CDH13 code la T‑cadhérine (cadhérine‑13), une cadhérine atypique ancrée par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), dépourvue de domaines transmembranaire et cytoplasmique, qui agit comme modulateur de l’adhésion et de la signalisation à la surface cellulaire. La T‑cadhérine influence les interactions cellule–cellule, la croissance des neurites et l’organisation synaptique, ainsi que le comportement vasculaire/endothélial, en intégrant des signaux qui affectent le remodelage du cytosquelette et les voies de signalisation dépendantes du contact. Des variations de CDH13 et des modifications de son expression ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ainsi qu’à des traits cardiométaboliques et vasculaires, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de la connectivité cérébrale et de la dysfonction endothéliale. L’édition génétique de CDH13 permet d’analyser les mécanismes de la signalisation médiée par les cadhérines indépendamment de l’adhésion, de cartographier les effets des variants sur la localisation et la fonction de la protéine, et de développer des modèles cellulaires pour l’analyse des voies et l’investigation des relations génotype–phénotype.

T-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

T-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de T-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de T-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie T-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.