Synoviolin Plasmide Double Nickase (h): sc-403476-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Synoviolin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Synoviolin Double Nickase Plasmid (h) e il Synoviolin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SYVN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Synoviolin Antibody (4H4): sc-293484
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Synoviolin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403476-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Synoviolin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403476-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYVN1 codifica la sinoviolina, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING residente nel reticolo endoplasmatico (RE), che opera nella degradazione associata al RE (ERAD) ubiquitinando proteine mal ripiegate o in eccesso per indirizzarle alla degradazione proteasomiale. Attraverso la modulazione del controllo di qualità proteico dipendente dall’ubiquitina, la sinoviolina influenza la proteostasi del RE, le risposte cellulari allo stress e le reti di segnalazione infiammatoria. Un’alterata attività di SYVN1 è stata associata a una gestione deregolata dello stress del RE e a un’omeostasi proteica anomala in contesti che includono l’iperplasia sinoviale e altre patologie correlate all’infiammazione. In quanto regolatore dell’ubiquitinazione e dell’ERAD, SYVN1 è ampiamente studiato nei meccanismi che collegano la proteostasi alla sopravvivenza cellulare, alla segnalazione immunitaria e al rimodellamento tissutale.
Synoviolin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SYVN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SYVN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SYVN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SYVN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.