Plasmide CRISPR d'Activation (m) Synaptojanin 2: sc-423241-ACT

Le gène murin Synj2 code la synaptojanine 2, une 5‑phosphatase des phosphoinositides qui régule la signalisation du phosphatidylinositol en déphosphorylant le PIP2 et des lipides apparentés au niveau des membranes endocytiques. En contrôlant l’endocytose médiée par la clathrine, l’internalisation des récepteurs et le remodelage membranaire dépendant de l’actine, la synaptojanine 2 contribue à coordonner le trafic vésiculaire et la dynamique de la signalisation intracellulaire. L’activité de la famille des synaptojanines est étroitement liée au recyclage des vésicules synaptiques et, plus largement, à l’homéostasie des membranes neuronales, et des altérations du métabolisme des phosphoinositides ont été impliquées dans des mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives. Synj2 est également étudié dans des contextes où le flux endocytique et le renouvellement des phosphoinositides influencent la signalisation des facteurs de croissance et les phénotypes de migration cellulaire.

Synaptojanin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Synj2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Synaptojanin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Synj2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Synj2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Synaptojanin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Synj2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Synaptojanin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Synaptojanin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Synj2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.