Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400186-NIC

SOD1 codifica la superossido dismutasi citosolica Cu/Zn che catalizza la dismutazione dei radicali superossido in perossido di idrogeno e ossigeno, costituendo una prima linea di difesa contro lo stress ossidativo. Controllando il flusso delle specie reattive dell’ossigeno, SOD1 influenza l’omeostasi redox, la funzione mitocondriale e le vie di segnalazione a valle che collegano il carico ossidativo a infiammazione, proteostasi e programmi di sopravvivenza cellulare. Un’attività o una stabilità di SOD1 deregolate sono associate a una capacità antiossidante alterata e a stati inclini all’aggregazione che perturbano la biologia dei motoneuroni e delle cellule gliali. Di conseguenza, SOD1 è ampiamente studiata nella neurodegenerazione, nel rimodellamento metabolico sensibile al redox e nelle reti di risposta cellulare allo stress.

Superoxide Dismutase 1/SOD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SOD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SOD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SOD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SOD1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.