STOML2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403638-ACT

STOML2 (proteina 2 simile alla stomatina) è una proteina associata alla membrana mitocondriale interna, implicata nell’organizzazione di microdomini di membrana che supportano la biogenesi mitocondriale e la funzione della catena respiratoria. Contribuisce alla proteostasi e alla dinamica mitocondriale influenzando l’assemblaggio dei complessi proteici e mantenendo l’integrità delle creste, collegandosi così al metabolismo energetico cellulare e all’adattamento allo stress. Un’espressione alterata di STOML2 è stata associata a cambiamenti nella fosforilazione ossidativa, nella gestione delle specie reattive dell’ossigeno e nella sensibilità all’apoptosi, processi frequentemente studiati nella biologia del cancro e nella neurodegenerazione. In quanto fattore regolatore dei mitocondri, STOML2 viene comunemente analizzata in vie che collegano la riprogrammazione metabolica, il controllo di qualità mitocondriale e la segnalazione di sopravvivenza cellulare.

STOML2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STOML2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

STOML2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STOML2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STOML2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di STOML2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STOML2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da STOML2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via STOML2 nelle cellule tumorali con espressione di STOML2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.