STK32A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408625

Panoramica

STK32A codifica una proteina chinasi serina/treonina implicata nel controllo fosforilazione-dipendente della segnalazione cellulare, con potenziali ruoli nella regolazione della crescita cellulare, della differenziazione e di processi associati al citoscheletro. In quanto membro di una famiglia di chinasi, STK32A è in posizione tale da influenzare cascate di chinasi che modellano programmi trascrizionali e output di segnalazione responsivi allo stress. Un’attività o un’espressione chinasica alterata è spesso collegata a una proliferazione disregolata e a un rimodellamento dei pathway dipendente dal contesto nel cancro e in altre malattie complesse, rendendo STK32A rilevante per studi meccanicistici. La caratterizzazione delle reti di fosforilazione dipendenti da STK32A può chiarire come la connettività della segnalazione cambi tra diversi stati cellulari e modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO STK32A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene STK32A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del STK32A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto STK32A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina STK32A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di STK32A per lo studio della segnalazione di STK32A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni STK32A critici per la funzione di STK32A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di STK32A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal STK32A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal STK32A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus STK32A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal STK32A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR STK32A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia STK32A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio STK32A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.