Stat1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400086-LAC

STAT1 umano codifica Stat1, un fattore di trascrizione centrale nella segnalazione di interferoni e citochine che trasduce i segnali a valle dei recettori degli interferoni di tipo I, II e III tramite la via JAK–STAT. Dopo la fosforilazione, Stat1 dimerizza e si accumula nel nucleo per regolare i geni stimolati dagli interferoni coinvolti nella difesa antivirale, nella presentazione dell’antigene, nell’apoptosi e nel controllo della proliferazione cellulare. L’attività di STAT1 interagisce anche con vie dell’immunità innata, come la segnalazione dei recettori di riconoscimento dei pattern e i programmi infiammatori dipendenti da NF-κB, plasmando le risposte di macrofagi e linfociti T. Una segnalazione STAT1 deregolata è stata associata ad alterazioni della difesa dell’ospite e dell’omeostasi immunitaria ed è frequentemente studiata nel contesto della biologia delle malattie infettive, dell’infiammazione e delle interazioni tumore–sistema immunitario.

Le particelle di attivazione lentivirale Stat1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di STAT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Stat1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione STAT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Stat1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo STAT1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.