SSH1 Plasmide Double Nickase (m): sc-433087-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SSH1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SSH1 Double Nickase Plasmid (m) e il SSH1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ssh1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SSH1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-433087-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SSH1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-433087-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La SSH1 (Slingshot-1) del topo è una fosfatasi a doppia specificità che regola il rimodellamento del citoscheletro di actina defosforilando e riattivando la cofilina, favorendo il turnover dell’F-actina e la motilità cellulare direzionale. Attraverso l’integrazione con la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, con le vie LIMK/cofilina e con reti di fosfatasi sensibili allo stress, SSH1 contribuisce a coordinare la dinamica dei lamellipodi, la crescita dei neuriti e la migrazione dipendente dall’adesione. Un’attività alterata di SSH1 è stata collegata a una disorganizzazione del citoscheletro e a fenotipi di movimento cellulare compromesso, rilevanti per studi di neuro-sviluppo, infiammazione e modelli di invasione tumorale. Nei sistemi murini, SSH1 viene quindi spesso studiata per il suo ruolo nella meccanotrasduzione, nella plasticità sinaptica e nel rimodellamento tissutale dipendente dalla migrazione.
SSH1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ssh1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ssh1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ssh1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ssh1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.