SRCAP Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403049-LAC

SRCAP (Snf2-related CREBBP activator protein) codifica un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente che funge da subunità catalitica del complesso SRCAP, il quale media lo scambio di varianti istoniche depositando H2A.Z nei nucleosomi. Attraverso la regolazione del posizionamento dei nucleosomi e dell’accessibilità della cromatina, SRCAP influenza programmi di controllo trascrizionale, risposte di riparazione del DNA e dinamiche della cromatina legate al ciclo cellulare. L’incorporazione di H2A.Z dipendente da SRCAP contribuisce alla funzione di promotori ed enhancer e si interseca con vie che governano la stabilità del genoma e la differenziazione. L’alterazione genetica o la disregolazione di SRCAP è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e a una regolazione trascrizionale alterata, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici sul rimodellamento della cromatina nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SRCAP (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SRCAP in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SRCAP (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SRCAP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SRCAP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SRCAP e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.