SRC-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400879-NIC

NCOA1 codifica per il coattivatore del recettore degli steroidi-1 (SRC-1), un coattivatore trascrizionale che funge da ponte tra i recettori nucleari attivati dal ligando e altri fattori di trascrizione, collegandoli a complessi di modificazione della cromatina. SRC-1 coordina l’acetilazione e il rimodellamento degli istoni per regolare programmi genici coinvolti nella risposta ormonale, nella proliferazione, nel metabolismo e nella differenziazione. Partecipa a reti di segnalazione guidate dai recettori di estrogeni, androgeni, progesterone, glucocorticoidi e ormoni tiroidei, e interseca vie come MAPK/ERK e PI3K/AKT tramite dinamiche del coattivatore dipendenti dalla fosforilazione. Un’espressione o un’attività deregolata di NCOA1/SRC-1 è stata associata ad alterazioni della segnalazione endocrina e a riprogrammazione trascrizionale osservate in diversi tumori e in contesti metabolici e infiammatori, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi di regolazione genica.

SRC-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NCOA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NCOA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NCOA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NCOA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.