SR-7 Plasmide Double Nickase (h): sc-404174-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SR-7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SR-7 Double Nickase Plasmid (h) e il SR-7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HTR7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SR-7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’HTR7 umano codifica il recettore della serotonina 7 (SR-7), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che segnala principalmente attraverso Gαs per stimolare l’adenilil ciclasi, aumentare i livelli di cAMP e attivare programmi trascrizionali dipendenti da PKA/CREB. SR-7 interagisce anche con le impalcature di β-arrestina e può influenzare la segnalazione ERK/MAPK, collegando gli input serotoninergici a cambiamenti nell’eccitabilità neuronale, nella plasticità sinaptica e nella regolazione circadiana. Nel sistema nervoso centrale, l’attività di HTR7 contribuisce a processi neuroevolutivi e neurofisiologici, e una segnalazione GPCR serotoninergica deregolata è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e legati al sonno. Al di fuori del cervello, la segnalazione cAMP mediata da SR-7 rappresenta una via sperimentale maneggevole per studiare desensibilizzazione dei GPCR, traffico recettoriale e dinamiche dei secondi messaggeri.
SR-7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTR7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTR7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTR7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTR7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.