SQSTM1/p62 Plasmide Double Nickase (h): sc-400099-NIC

SQSTM1 (p62) è una proteina adattatrice multifunzionale che collega i carichi poliubiquitinati agli autofagosomi tramite il suo dominio associato all’ubiquitina e la regione di interazione con LC3, coordinando l’autofagia selettiva e la proteostasi. Funziona inoltre come hub di segnalazione in vie che includono le risposte allo stress ossidativo KEAP1–NRF2, l’attivazione di NF-κB e il sensing dei nutrienti mediato da mTORC1, integrando segnali di stress e infiammazione con il controllo metabolico. Attraverso questi ruoli, SQSTM1 influenza la rimozione degli aggregati, il controllo di qualità mitocondriale e le decisioni di sopravvivenza cellulare. Una biologia di SQSTM1/p62 deregolata è frequentemente oggetto di studio nella neurodegenerazione, nell’adattamento delle cellule tumorali allo stress e nei disturbi infiammatori in cui risultano alterate l’autofagia e la segnalazione redox.

SQSTM1/p62 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SQSTM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SQSTM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SQSTM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SQSTM1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.