Plásmido Doble Nickase (h) SphK2: sc-417921-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SphK2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SphK2 (h) y el plásmido de doble nickasa SphK2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SPHK2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SphK2 Anticuerpo (9C5E1): sc-517192
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SphK2 | sc-417921-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SphK2 | sc-417921-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPHK2 codifica la esfingosina quinasa 2 (SphK2), una enzima que fosforila la esfingosina para generar esfingosina-1-fosfato (S1P), un mediador lipídico bioactivo que integra redes metabólicas y de señalización. A través de la producción de S1P y su compartimentalización subcelular, SphK2 influye en procesos vinculados a MAPK/ERK, PI3K–AKT y NF-κB que modulan la proliferación, la supervivencia, las respuestas al estrés y la señalización inflamatoria. La actividad de SphK2 también se interconecta con funciones mitocondriales y nucleares, contribuyendo a la regulación de la apoptosis, el control epigenético y la bioenergética celular. La desregulación del metabolismo de la S1P y de la señalización asociada a SPHK2 se ha implicado en contextos como la biología del cáncer, la disfunción inmunitaria y mecanismos de enfermedad cardiometabólica y neuroinflamatoria.
SphK2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SPHK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SPHK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SPHK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SPHK2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.