SphK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-417921-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SphK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SphK2 Double Nickase Plasmid (h) e il SphK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SPHK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SphK2 Antibody (9C5E1): sc-517192
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SphK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-417921-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SphK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-417921-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPHK2 codifica la sfingosina chinasi 2 (SphK2), un enzima che fosforila la sfingosina generando sfingosina-1-fosfato (S1P), un mediatore lipidico bioattivo che integra reti metaboliche e di segnalazione. Attraverso la produzione di S1P e la compartimentalizzazione subcellulare, SphK2 influenza processi legati a MAPK/ERK, PI3K–AKT e NF-κB che modellano proliferazione, sopravvivenza, risposte allo stress e segnalazione infiammatoria. L’attività di SphK2 interagisce anche con funzioni mitocondriali e nucleari, contribuendo alla regolazione dell’apoptosi, al controllo epigenetico e alla bioenergetica cellulare. La disregolazione del metabolismo di S1P e della segnalazione associata a SPHK2 è stata implicata in contesti quali la biologia dei tumori, la disregolazione immunitaria e i meccanismi di malattie cardiometaboliche e neuroinfiammatorie.
SphK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPHK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPHK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPHK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPHK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.