Sp2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405026-ACT

SP2 umano codifica Sp2, un fattore di trascrizione della famiglia Sp/KLF espresso in modo ubiquitario che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare la trascrizione basale di geni coinvolti nella progressione del ciclo cellulare, nell’organizzazione della cromatina e nell’omeostasi metabolica. L’attività di Sp2 si interfaccia con il controllo trascrizionale dipendente dall’RNA polimerasi II e può influenzare reti di regolazione genica determinate dall’architettura del promotore e dallo stato epigenetico. Programmi trascrizionali deregolati della famiglia Sp sono stati associati ad alterazioni della proliferazione e della segnalazione di risposta allo stress, a supporto dell’indagine di SP2 in contesti quali il rimodellamento trascrizionale oncogenico e difetti di differenziazione specifici di linea. In quanto regolatore nucleare che si lega al DNA, Sp2 è comunemente studiato per il suo ruolo nell’occupazione dei promotori, nel crosstalk tra fattori di trascrizione e nella modulazione delle vie a valle.

Sp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SP2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sp2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SP2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SP2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sp2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SP2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sp2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sp2 nelle cellule tumorali con espressione di SP2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.