SP-D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422903

Panoramica

Sftpd codifica la proteina del surfattante D (SP-D), una collectina secreta prodotta principalmente dalle cellule alveolari di tipo II e dalle cellule di Clara, che contribuisce all’omeostasi del surfattante polmonare e alla difesa immunitaria innata sulle superfici mucosali. SP-D riconosce pattern glucidici su microrganismi e cellule apoptotiche, promuovendo opsonizzazione, agglutinazione e la modulazione dell’attività di macrofagi e neutrofili attraverso interazioni dipendenti dalla lectina. Dal punto di vista funzionale, SP-D si interseca con vie che controllano la proteostasi alveolare, la segnalazione delle citochine infiammatorie e le risposte allo stress ossidativo che plasmano l’integrità della barriera delle vie aeree. Un’alterata attività di Sftpd/SP-D è associata a una disregolazione dell’infiammazione e del rimodellamento polmonare, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi di danno polmonare acuto, di fenotipi simili ad asma e BPCO e della suscettibilità alle infezioni respiratorie in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SP-D (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sftpd in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sftpd insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sftpd a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SP-D.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sftpd per lo studio della segnalazione di SP-D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sftpd critici per la funzione di SP-D
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sftpd per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SP-D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SP-D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sftpd. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SP-D Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SP-D (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sftpd per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sftpd definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.