Sox9 Plasmide Double Nickase (h): sc-400143-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sox9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sox9 Double Nickase Plasmid (h) e il Sox9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SOX9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sox9 Antibody (E-9): sc-166505
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sox9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sox9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SOX9 codifica il fattore di trascrizione Sox9, una proteina legante il DNA del gruppo ad alta mobilità (HMG) che regola la specificazione di linea cellulare e i programmi di differenziamento in molteplici tessuti. Durante lo sviluppo e nell’omeostasi dell’adulto, Sox9 integra input di segnalazione quali TGF-β/BMP, WNT/β-catenina, Hedgehog e Notch per controllare reti geniche coinvolte nella condrogenesi, nel mantenimento di cellule staminali/progenitrici e nelle decisioni di destino delle cellule epiteliali. L’attività di SOX9 influenza la produzione di matrice extracellulare e la dinamica del ciclo cellulare attraverso il controllo trascrizionale diretto di loci bersaglio e la cooperazione con fattori di trascrizione partner. Un’espressione o una funzione deregolata di SOX9 è stata associata a disturbi scheletrici congeniti e contribuisce a stati patologici che coinvolgono differenziamento aberrante e programmi trascrizionali oncogenici, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per studi meccanicistici della biologia dello sviluppo e delle malattie.
Sox9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SOX9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SOX9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SOX9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SOX9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.