Sox-17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401192-ACT

SOX17 codifica il fattore di trascrizione Sox-17, una proteina di legame al DNA del gruppo ad alta mobilità (HMG) che svolge ruoli essenziali nella specificazione dell’endoderma definitivo, nel patterning embrionale e nell’impegno di linea cellulare. Nelle cellule umane, Sox-17 si integra con i programmi trascrizionali associati a WNT/β-catenina, TGF-β/SMAD e Notch per regolare geni che controllano la differenziazione, l’organizzazione epiteliale e la tempistica dello sviluppo. Un’alterata espressione di SOX17 o una sua deregolazione è stata collegata a difetti nei tessuti derivati dall’endoderma e a fenotipi rilevanti per il cancro, inclusi cambiamenti nella proliferazione, nella migrazione e nella stabilità dello stato cellulare. In quanto regolatore dello sviluppo, SOX17 è frequentemente utilizzato come marcatore e come driver funzionale negli studi di differenziazione delle cellule staminali e di mappatura del destino cellulare.

Sox-17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-17 nelle cellule tumorali con espressione di SOX17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.