Sox-11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401078-ACT

SOX11 codifica il fattore di trascrizione Sox-11, una proteina legante il DNA del gruppo ad alta mobilità (HMG) che regola programmi di espressione genica responsabili dello sviluppo neurale, dell’impegno di linea e della differenziazione cellulare. Sox-11 si integra nelle reti trascrizionali dello sviluppo e nella regolazione dipendente dalla cromatina, influenzando processi quali l’estensione dei neuriti, il mantenimento dei progenitori e le transizioni del destino cellulare. Un’espressione deregolata di SOX11 è stata associata ad alterazioni della segnalazione dello sviluppo e a stati trascrizionali aberranti osservati in diversi contesti patologici, inclusi disturbi del neurosviluppo e oncologia. In quanto regolatore nucleare, Sox-11 è spesso studiato per i suoi geni bersaglio a valle e per il suo ruolo nel rimodellare i circuiti trascrizionali durante stress e differenziazione.

Sox-11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SOX11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Sox-11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SOX11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SOX11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Sox-11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SOX11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Sox-11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Sox-11 nelle cellule tumorali con espressione di SOX11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.