SNAI 1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-423047-ACT

Snai1 codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco SNAI1, un regolatore principale della transizione epitelio–mesenchimale (EMT) che reprime geni delle giunzioni epiteliali come Cdh1 e rimodella i programmi del citoscheletro e dell’adesione. Nelle cellule murine, SNAI1 integra segnali provenienti da TGF-β, WNT/β-catenina, Notch e vie associate all’ipossia per controllare la plasticità di linea, la motilità e le interazioni con la matrice extracellulare. Questa rete trascrizionale è centrale nella morfogenesi embrionale e nel rimodellamento tissutale, e l’attività deregolata di SNAI1 è frequentemente studiata nei contesti della fibrosi e della biologia tumorale invasiva. I programmi dipendenti da SNAI1 intersecano anche la segnalazione infiammatoria e il mantenimento di stati cellulari simili a quelli staminali, a supporto della sua ampia rilevanza nella ricerca meccanicistica sulle vie di segnalazione.

SNAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Snai1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNAI 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Snai1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Snai1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNAI 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Snai1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNAI 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNAI 1 nelle cellule tumorali con espressione di Snai1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.