SMARCA4/Brg1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400168-NIC

SMARCA4 (Brg1) codifica il nucleo catalitico ATPasico del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF), che riposiziona i nucleosomi per regolare programmi trascrizionali che controllano la specificazione di linea cellulare, la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e la differenziazione. Attraverso il rimodellamento della cromatina dipendente dall'ATP, SMARCA4 influenza l'accessibilità degli enhancer e coopera con fattori di trascrizione specifici di sequenza per modulare l'espressione genica lungo vie di sviluppo e di risposta allo stress. L'alterazione di SMARCA4 perturba lo stato della cromatina e la regolazione del genoma, e modifiche ricorrenti sono collegate a un controllo epigenetico aberrante e a un cablaggio trascrizionale oncogenico in molteplici contesti tumorali. In quanto regolatore centrale della cromatina, SMARCA4 è ampiamente studiata nell'accessibilità della cromatina, nella mappatura delle dipendenze trascrizionali e nelle reti di letalità sintetica che coinvolgono subunità SWI/SNF e la repressione mediata da Polycomb.

SMARCA4/Brg1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMARCA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMARCA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMARCA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMARCA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.