Plásmido Doble Nickase (h) SMARCA4/Brg1: sc-400168-NIC

SMARCA4 (Brg1) codifica el núcleo catalítico con actividad ATPasa del complejo de remodelación de cromatina SWI/SNF (BAF), que reposiciona los nucleosomas para regular programas transcripcionales que controlan la especificación de linaje, la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación. Mediante el remodelado de cromatina dependiente de ATP, SMARCA4 influye en la accesibilidad de los potenciadores (enhancers) y coopera con factores de transcripción específicos de secuencia para modular la expresión génica a lo largo de vías del desarrollo y de respuesta al estrés. La disrupción de SMARCA4 altera el estado de la cromatina y la regulación del genoma, y sus alteraciones recurrentes se asocian con un control epigenético anómalo y con un cableado transcripcional oncogénico en múltiples contextos tumorales. Como regulador central de la cromatina, SMARCA4 se estudia ampliamente en el análisis de accesibilidad de la cromatina, el mapeo de dependencias transcripcionales y las redes de letalidad sintética que involucran subunidades de SWI/SNF y la represión mediada por Polycomb.

SMARCA4/Brg1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMARCA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMARCA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMARCA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMARCA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.