Smad4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400110-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Smad4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Smad4 Double Nickase Plasmid (h) e il Smad4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SMAD4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Smad4 Antibody (B-8): sc-7966
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Smad4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD4 codifica Smad4, un co-mediatore centrale della segnalazione canonica di TGF-β e BMP che forma complessi eteromerici con gli SMAD regolati dal recettore per controllare programmi trascrizionali che governano proliferazione, differenziamento e dinamiche epitelio–mesenchimali. In seguito all’attivazione del recettore indotta dal ligando, i complessi contenenti Smad4 si accumulano nel nucleo e integrano input da vie quali MAPK, WNT/β-catenina e PI3K/AKT per modellare un’espressione genica dipendente dal contesto. L’alterazione di SMAD4 compromette il controllo della crescita e l’omeostasi tissutale dipendenti da TGF-β ed è spesso associata alla disfunzione di un oncosoppressore nelle neoplasie gastrointestinali e pancreatiche. In quanto hub di segnalazione, SMAD4 è ampiamente studiato per i suoi ruoli nello sviluppo, negli stati trascrizionali legati alla fibrosi e nella regolazione genica immunomodulatoria.
Smad4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SMAD4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SMAD4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SMAD4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SMAD4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.