SLM-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407141-ACT

O KHDRBS3 humano codifica a SLM-2, uma proteína de ligação a RNA da família STAR que regula o splicing alternativo e o processamento de RNA por meio do reconhecimento de motivos de sequência específicos em pré-mRNAs. A SLM-2 influencia a seleção de isoformas de transcritos de maneira dependente do tecido e do contexto, moldando programas ligados à função neuronal e a uma regulação gênica pós-transcricional mais ampla. Ao modular a escolha de sítios de splicing e a maturação do mRNA, o KHDRBS3 pode afetar saídas de sinalização e a diversidade do proteoma, tornando-se relevante para o estudo de redes regulatórias de RNA e do splicing desregulado observado em doenças complexas. Alterações na expressão ou desequilíbrios de fatores de splicing envolvendo a SLM-2 têm sido investigados em mecanismos de acoplamento transcricional ao processamento de RNA e em mudanças de isoformas associadas a doenças.

SLM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KHDRBS3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KHDRBS3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KHDRBS3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLM-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KHDRBS3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLM-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLM-2 em células tumorais com expressão de KHDRBS3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.