Plásmido CRISPR de Activación (h) SLM-2: sc-407141-ACT

El gen humano **KHDRBS3** codifica **SLM-2**, una proteína de unión a ARN de la familia STAR que regula el empalme alternativo y el procesamiento del ARN mediante el reconocimiento de motivos de secuencia específicos en los pre-ARNm. SLM-2 influye en la selección de isoformas de los transcritos de manera dependiente del tejido y del contexto, configurando programas vinculados a la función neuronal y a una regulación génica postranscripcional más amplia. Al modular la elección de sitios de empalme y la maduración del ARNm, KHDRBS3 puede afectar los resultados de señalización y la diversidad del proteoma, lo que lo hace relevante para estudiar redes de regulación del ARN y el empalme desregulado observado en diversas enfermedades complejas. La expresión alterada o el desequilibrio de factores de empalme que involucran a SLM-2 se ha investigado en mecanismos de acoplamiento de la transcripción con el procesamiento del ARN y en el cambio de isoformas asociado a enfermedad.

SLM-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KHDRBS3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLM-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KHDRBS3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KHDRBS3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLM-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KHDRBS3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLM-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLM-2 en células tumorales con expresión de KHDRBS3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.