SLM-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407141-ACT

Il gene umano **KHDRBS3** codifica **SLM-2**, una proteina legante l’RNA della famiglia **STAR** che regola lo splicing alternativo e la processazione dell’RNA tramite il riconoscimento di specifici motivi di sequenza nei pre-mRNA. SLM-2 influenza la selezione delle isoforme trascrittomiche in modo dipendente dal tessuto e dal contesto, plasmando programmi collegati alla funzione neuronale e, più in generale, alla regolazione genica post-trascrizionale. Modulando la scelta dei siti di splicing e la maturazione dell’mRNA, KHDRBS3 può influenzare gli output di segnalazione e la diversità del proteoma, rendendolo rilevante per lo studio delle reti di regolazione dell’RNA e dello splicing deregolato osservato in diverse malattie complesse. Alterazioni dell’espressione o squilibri dei fattori di splicing che coinvolgono SLM-2 sono stati indagati nei meccanismi di accoppiamento tra trascrizione e processazione dell’RNA e nel cambio di isoforme associato a patologie.

SLM-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KHDRBS3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLM-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KHDRBS3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KHDRBS3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLM-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KHDRBS3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLM-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLM-2 nelle cellule tumorali con espressione di KHDRBS3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.