SLC25A3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404129-ACT

SLC25A3 codifica un trasportatore di soluti della membrana interna mitocondriale che trasferisce fosfato inorganico nella matrice, supportando la fosforilazione ossidativa fornendo il substrato per l’ATP sintasi. Accoppiando l’importazione del fosfato al potenziale di membrana mitocondriale, SLC25A3 contribuisce a regolare la bioenergetica cellulare, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e la flessibilità metabolica nei tessuti ad alta richiesta energetica. Alterazioni della funzione di SLC25A3 sono state collegate a fenotipi di disfunzione mitocondriale che interessano la fisiologia muscolare e cardiaca, rendendolo rilevante per studi sulle miopatie mitocondriali e sulle risposte allo stress cardiometabolico. Questo gene è utile anche per chiarire come la disponibilità di fosfato si intersechi con l’attività della catena respiratoria e con la segnalazione mitocondriale correlata all’apoptosi.

SLC25A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC25A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SLC25A3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC25A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC25A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SLC25A3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC25A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SLC25A3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SLC25A3 nelle cellule tumorali con espressione di SLC25A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.