Plasmide Double Nickase (h) SK1: sc-403325-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SK1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SK1 Double Nickase (h) et le plasmide SK1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNN1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SK1 | sc-403325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SK1 | sc-403325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **KCNN1** code le canal potassique **SK1** à faible conductance, activé par le Ca2+, une conductance K+ contrôlée par la calmoduline qui relie la dynamique intracellulaire du Ca2+ à la repolarisation membranaire. En modulant l’après-hyperpolarisation et les schémas de décharge, SK1 contribue au contrôle Ca2+-dépendant de l’excitabilité neuronale et de l’intégration des signaux, avec d’autres rôles décrits dans d’autres types cellulaires électriquement actifs et sécrétoires. L’activité de KCNN1 s’inscrit à l’interface de la signalisation Ca2+/calmoduline, des programmes transcriptionnels dépendants de l’excitabilité et des voies d’homéostasie ionique qui influencent les réponses au stress cellulaire. Le dysfonctionnement des canaux de la famille SK a été étudié dans des contextes neurophysiologiques et neuropsychiatriques, où l’altération de l’excitabilité intrinsèque et de la synchronisation des réseaux constitue des paramètres expérimentaux pertinents.
SK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNN1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.