SK1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403325-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SK1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SK1 Double Nickase Plasmid (h) e il SK1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KCNN1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SK1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SK1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **KCNN1** codifica il canale del potassio **SK1** a piccola conduttanza, attivato dal Ca2+: una conduttanza di K+ regolata dalla calmodulina che collega la dinamica intracellulare del Ca2+ alla ripolarizzazione di membrana. Modellando l’afteriperpolarizzazione e i pattern di scarica, SK1 contribuisce al controllo Ca2+-dipendente dell’eccitabilità neuronale e dell’integrazione dei segnali; sono stati inoltre riportati ruoli aggiuntivi in altri tipi cellulari elettricamente attivi e in cellule secernenti. L’attività di KCNN1 si intreccia con la segnalazione Ca2+/calmodulina, con programmi trascrizionali dipendenti dall’eccitabilità e con vie dell’omeostasi ionica che influenzano le risposte cellulari allo stress. La deregolazione della funzione dei canali della famiglia SK è stata studiata nel contesto della neurofisiologia e di fenotipi neuropsichiatrici, in cui l’alterazione dell’eccitabilità intrinseca e della sincronizzazione di rete rappresenta un importante readout sperimentale.
SK1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNN1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.