Siva Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403496-ACT

Il gene umano **SIVA1** codifica **Siva**, una proteina adattatrice pro-apoptotica identificata originariamente grazie alla sua interazione con membri della famiglia dei recettori del TNF, che collega segnali extracellulari di morte alla segnalazione intracellulare. Siva partecipa alla regolazione dell’apoptosi e delle risposte allo stress cellulare, con ruoli riportati nella modulazione dell’attività di **NF-κB** e nell’integrazione di segnali che influenzano l’integrità mitocondriale e l’attivazione delle caspasi. Poiché contribuisce a determinare le decisioni sul destino cellulare e le vie di sopravvivenza, la dinamica di espressione di **SIVA1** viene spesso analizzata in contesti di trasformazione oncogena, reti di soppressori tumorali e segnalazione immuno-correlata. Un’attività deregolata di **SIVA1/Siva** è stata associata a una sensibilità alterata agli stimoli apoptotici e a cambiamenti nella proliferazione e nelle risposte al danno al DNA, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in modelli rilevanti per la malattia.

Siva Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SIVA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Siva Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SIVA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SIVA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Siva. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SIVA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Siva nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Siva nelle cellule tumorali con espressione di SIVA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.