SIRT5 Plasmide Double Nickase (m): sc-427028-NIC

Il gene murino **Sirt5** codifica la sirtuina mitocondriale **SIRT5**, una deacilasi della lisina dipendente da NAD⁺ con spiccate attività desuccinilasica, demalonilasica e deglutarilasica, che modulano la funzione degli enzimi mitocondriali. Invertendo modificazioni acil-lisina non acetiliche, SIRT5 contribuisce a regolare il metabolismo centrale del carbonio, l’ossidazione degli acidi grassi, il ciclo dell’urea e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, sostenendo così l’omeostasi mitocondriale durante stress nutrizionale e ossidativo. In letteratura, un’attività alterata di SIRT5 è stata collegata a riprogrammazione metabolica, squilibrio redox e fenotipi di disfunzione mitocondriale che intersecano vie rilevanti per le patologie cardiometaboliche e la neurodegenerazione. Queste caratteristiche rendono **Sirt5** un bersaglio utile per studiare il controllo post-traduzionale dei flussi mitocondriali e la segnalazione adattativa allo stress nelle cellule di mammifero.

SIRT5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sirt5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sirt5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sirt5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sirt5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.