SIRT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425703

Panoramica

Sirt2 codifica la deacetilasi NAD⁺-dipendente SIRT2, una sirtuina prevalentemente citosolica che regola l’acetilazione di proteine coinvolte nella dinamica dei microtubuli, nella progressione del ciclo cellulare e nell’omeostasi metabolica. SIRT2 modula processi chiave, tra cui il controllo del checkpoint mitotico, l’autofagia e le risposte allo stress ossidativo, collegando il sensing dei nutrienti alla funzione mitocondriale e del citoscheletro. Nei modelli murini, l’attività di SIRT2 è stata associata a vie rilevanti per la neurodegenerazione, l’infiammazione e la disregolazione metabolica, rendendola un nodo utile per indagare la resilienza allo stress specifica dei tessuti. Alterazioni della deacetilazione dipendente da SIRT2 possono influenzare programmi trascrizionali e reti di proteostasi che determinano la suscettibilità a fenotipi legati all’invecchiamento in vivo e in modelli di cellule primarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRT2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sirt2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sirt2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sirt2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SIRT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sirt2 per lo studio della segnalazione di SIRT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sirt2 critici per la funzione di SIRT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sirt2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SIRT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SIRT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sirt2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SIRT2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SIRT2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sirt2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sirt2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.