SIRT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425703

Descripción general

Sirt2 codifica la desacetilasa dependiente de NAD⁺ SIRT2, una sirtuina principalmente citosólica que regula la acetilación de proteínas implicadas en la dinámica de los microtúbulos, la progresión del ciclo celular y la homeostasis metabólica. SIRT2 modula procesos clave como el control del punto de control mitótico, la autofagia y las respuestas al estrés oxidativo, conectando la detección de nutrientes con la función mitocondrial y del citoesqueleto. En sistemas de ratón, la actividad de SIRT2 se ha asociado con vías relevantes para la neurodegeneración, la inflamación y la desregulación metabólica, lo que la convierte en un nodo útil para investigar la resiliencia al estrés específica de cada tejido. La desacetilación dependiente de SIRT2 alterada puede influir en programas transcripcionales y redes de proteostasis que determinan la susceptibilidad a fenotipos asociados al envejecimiento in vivo y en modelos de células primarias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SIRT2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sirt2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sirt2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sirt2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SIRT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sirt2 para la investigación de la señalización de SIRT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sirt2 críticos para la función de SIRT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sirt2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SIRT2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SIRT2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sirt2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SIRT2 (m) y el plásmido HDR SIRT2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sirt2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sirt2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.