Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SIRP-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401201
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIRP-α Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SIRP-α, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIRP-α Antibody (C-7): sc-376884
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIRP-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401201 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La proteina regolatrice del segnale alfa (SIRP-α), codificata dal gene umano **SIRPA**, è un recettore transmembrana della superfamiglia delle immunoglobuline espresso in modo marcato sulle cellule mieloidi, dove modula l’attivazione dell’immunità innata. Attraverso la fosforilazione dei motivi citoplasmatici **ITIM** e il reclutamento delle fosfatasi **SHP-1/SHP-2**, SIRP-α trasduce un segnale inibitorio a valle dell’interazione con **CD47**, regolando la dinamica del citoscheletro, la fagocitosi, l’adesione e le risposte citochiniche. Questo asse **CD47–SIRP-α** modella il comportamento di macrofagi e cellule dendritiche nei microambienti infiammatori ed è stato implicato nell’elusione immunitaria tumorale, nell’infiammazione cronica e nella disfunzione mieloide. Di conseguenza, **SIRPA** è ampiamente studiato nei circuiti che controllano l’omeostasi immunitaria, la funzione delle cellule presentanti l’antigene e il riconoscimento cellula-cellula.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SIRP-α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SIRPA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SIRPA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SIRPA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SIRP-α.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SIRPA per lo studio della segnalazione di SIRP-α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SIRPA critici per la funzione di SIRP-α
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SIRPA per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SIRP-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SIRP-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SIRPA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SIRP-α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SIRP-α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SIRPA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SIRPA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.