SIM2s Plasmide Double Nickase (h): sc-405609-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SIM2s Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SIM2s Double Nickase Plasmid (h) e il SIM2s Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SIM2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SIM2s Antibody (3E6): sc-517035
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SIM2s Plasmide Double Nickase (h) | sc-405609-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIM2s Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405609-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIM2 (single-minded family bHLH transcription factor 2) codifica l’isoforma umana SIM2s, un fattore di trascrizione bHLH (basic helix–loop–helix) con dominio PAS che regola programmi di espressione genica dipendenti dal contesto, coinvolti nella differenziazione cellulare e nella definizione dei pattern di sviluppo. SIM2s agisce tramite dimerizzazione mediata dal dominio PAS con fattori partner e legame a elementi regolatori simili agli E-box, collegandosi così a reti trascrizionali che modellano la specificazione di linea, lo stato epiteliale e la segnalazione responsiva allo stress. Un’alterata espressione di SIM2/SIM2s è stata associata a un controllo trascrizionale deregolato nella biologia dei tumori e nei disturbi dello sviluppo, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla regolazione genica e sul destino cellulare. Nella ricerca biomedica, SIM2s viene comunemente studiato per la sua influenza su esiti a livello di via, quali firme trascrizionali associate alla differenziazione, l’equilibrio epitelio–mesenchimale e circuiti regolatori legati alla proliferazione.
SIM2s Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SIM2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SIM2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SIM2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SIM2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.