SET7/9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405251-ACT

SETD7 (SET7/9) umano è una metiltransferasi della lisina contenente un dominio SET che monometila principalmente l’istone H3 in Lys4 (H3K4me1) e può anche modificare substrati non istonici, collegando lo stato della cromatina al controllo trascrizionale. Attraverso queste attività epigenetiche e di metilazione proteica, SET7/9 influenza la progressione del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento, le risposte allo stress e la regolazione dei geni metabolici. La segnalazione dipendente da SETD7 si interseca con vie governate da importanti fattori di trascrizione e snodi regolatori, plasmando output di espressione genica specifici del contesto. Un’attività o un’espressione deregolata di SETD7 è stata associata a reti trascrizionali alterate osservate nella biologia del cancro, nell’infiammazione e in modelli di malattie cardiometaboliche, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della regolazione epigenetica.

SET7/9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SETD7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SET7/9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SETD7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SETD7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SET7/9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SETD7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SET7/9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SET7/9 nelle cellule tumorali con espressione di SETD7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.